www成人免费视频_91视频合集_久久久999久久久_91字幕网_91漂亮少妇露脸在线播放_77久久

食品伙伴网服务号
当前位置: 首页 » 检验技术 » 食品采样技术 » 正文

PCR实验常见问题、原因分析及其解决方案!

放大字体  缩小字体 发布日期:2019-03-26  来源:实验之家
核心提示:PCR实验常见问题、原因分析及其解决方案。
PCR产物的电泳检测时间,一般为48h以内,有些最好于当日进行检查,大于48h后带型不规则甚至消失。
但有时仍会与到这样那样的问题,影响检测结果的判断,具体归类为以下常见的4点,描述如下:

问题一:无扩增产物
现象:正对照有条带,而样品则无。

原因:
1、模板:含有抑制物,含量低。
2、Buffer对样品不合适。
3、引物设计不当或者发生降解。
4、反应条件:退火温度太高,延伸时间太短。

对策:
1、纯化模板或者使用试剂盒提取模板DNA或加大模板的用量。
2、更换Buffer或调整浓度。
3、重新设计引物(避免链间二聚体和链内二级结构)或者换一管新引物。
4、降低退火温度、延长延伸时间。

问题二:非特异性扩增
现象:条带与预计的大小不一致或者非特异性扩增带。

原因:
1、引物特异性差。
2、模板或引物浓度过高。
3、酶量过多。
4、Mg2+浓度偏高。
5、退火温度偏低。
6、循环次数过多。

对策:
1、重新设计引物或者使用巢式PCR。
2、适当降低模板或引物浓度。
3、适当减少酶量。
4、降低镁离子浓度。
5、适当提高退火温度或使用二阶段温度法。
6、减少循环次数。

问题三:拖尾
现象:产物在凝胶上呈Smear状态。

原因:
1、模板不纯。
2、Buffer不合适。
3、退火温度偏低。
4、酶量过多。
5、dNTP、Mg 2+浓度偏高。
6、循环次数过多。

对策:
1、纯化模板。
2、更换Buffer。
3、适当提高退火温度。
4、适量用酶。
5、适当降低dNTP和镁离子的浓度。
6、减少循环次数。

问题四:假阳性
现象:空白对照出现目的扩增产物。

原因:
靶序列或扩增产物的交叉污染。

对策:   
1、操作时应小心轻柔,防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外。
2、除酶及不能耐高温的物质外,所有试剂或器材均应高压消毒。所用离心管及加样枪头等均应一次性使用。
3、各种试剂最好先进行分装,然后低温贮存。
编辑:songjiajie2010

 
分享:
[ 网刊订阅 ]  [ 检验技术搜索 ]  [ ]  [ 告诉好友 ]  [ 打印本文 ]  [ 关闭窗口 ] [ 返回顶部 ]
 

 
 
推荐图文
推荐检验技术
点击排行
检验技术
 
 
Processed in 0.024 second(s), 13 queries, Memory 0.95 M
主站蜘蛛池模板: 男女一级毛片免费播放 | 欧洲av无码放荡人妇网站 | 国产99久久精品 | 国产极品粉嫩福利姬萌白酱 | 欧美精品一区二区精品久久 | 黄色a级免费网站 | 国产成人精品电影在线观看 | 天堂√最新版中文在线天堂 | 在线va无码中文字幕 | 欧美精品www | 成人爱做日本视频免费 | 欧美老熟妇喷水 | 亚洲青青| 国产日韩av免费无码一区二区 | 思思干 | 玖玖天堂 | 国产精一品亚洲二区在线播放 | 免费一级欧美毛片 | 深夜福利小视频在线观看 | 免费能直接在线观看黄的视频 | 国内精品久久久久久久aa护士 | 国产自产第一区c国产 | 麻豆回家视频区一区二 | 伊人中文字幕波多野结衣 | 亚洲色一区二区三区四区 | 国产无遮挡a片又黄又爽网站 | 色老久久精品偷偷鲁一区 | 久久精品亚洲牛牛影视 | 亚洲免费资源 | 国产精品自在拍在线拍 | 亚洲精品一区二区观看 | 国产日韩欧美三级 | 国产嘿嘿嘿视频在线观看 | 91在线视频免费看 | 日产精品99久久久久久 | 亚洲最大在线视频 | 欧美不卡精品中文字幕日韩 | 看全色黄大色大片免费久久久 | 天天躁夜夜躁狠狠躁2021 | 免费一区二区三区久久 | 97久久国产一区二区三区四区 |