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葛根含量测定方法(葛根素)

放大字体  缩小字体 发布日期:2007-05-14

   葛根为豆科植物野葛Pueraria lobata(Willd.)Ohwi的干燥根。2005版《中国药典》一部采用高效液相色谱法测定其葛根素的含量。
    一、高效液相色谱法
    2005版《中国药典》葛根含量测定项下:
    色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-水(25:75)为流动相;检测波长为250nm。理论板数按葛根素峰计算应不得低于4000。
    供试品溶液的制备:取本品粉末约0.1g,精密称定,置锥形瓶中,精密加入30%乙醇50ml,称定重量,加热回流30分钟,放冷,再称定重量,用30%乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
    HPLC法测定葛根及其制剂中葛根素的含量时,使用最多的流动相系统为甲醇-水系统,另外还有甲醇-水,加醋酸调节pH等。
    A:以甲醇-水为系统的,常见的比例及实验条件为:
    ①Waters2695/ 2996/ Empower 色谱系统;色谱柱Symmetry C18 柱( 3.9mm×150mm, 5μm);流动相:甲醇-水(25:75);DAD检测波长254nm;柱温35℃。
    ②SP8800 型高效液相色谱泵;Hypersil ODS (4.6mm×250mm,5μm大连依利特科学有限公司);流动相:甲醇-水(30:70);柱温40℃;检测波长250nm。
    ③Waters高效液相色谱仪;十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱(4.6mm×250mm,5μm);甲醇-水(40:60)为流动相;检测波长为250nm;柱温30℃。
    ④美国Spectra-Physics 液相色谱仪;色谱柱Lunm C18 (150mm×4.6mm, 5μm ) 不锈钢柱(美国Phenom enex 公司);流动相为甲醇-水(28:72);检测波长250nm;柱温30℃。
    B:乙腈-水系统:
    ①LC-10ATvp高效液相色谱仪;Hypersil ODS 色谱柱(4.6mm×150mm,5μm);乙腈-水(15:85)为流动相;检测波长250nm。
    ②TSP 高效液相色谱仪;色谱柱Turner C18H37(5μm,4.6mm×150mm);流动相:乙醇-水(43:207);柱温30℃;检测波长250nm。
    C:加酸调节的,如:
    ①LC-10A高效液相色谱仪;色谱柱为ODSC18柱(5μm,4.6mm×150mm);流动相为甲醇-水(35:65),内含0.01%醋酸;柱温35℃;检测波长251nm。
    ②SP-8800高效液相色谱仪;色谱柱ODS-C18柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相:甲醇-1.4%醋酸溶液( 22:78 );柱温室温;测定波长: 250nm。
    ③美国Beckman公司高效液相色谱仪;Hypersil ODS柱(2.5μm,4.6mm×250mm);流动相为甲醇-氯仿-1.5%冰醋酸(22:1:77);检测波长250nm。
    ④SP1000 高效液相色谱泵;色谱柱YMC C18不锈钢柱(4.6mm×150mm,5μm);流动相:甲醇-水醋酸(42∶100:0.2);检测波长250nm;柱温:室温。
    其它如:吕竹芬等测定心血宁滴丸中葛根素的含量,采用高效液相色谱法,Dikma piamonsil C18色谱柱(4.6mm×200mm,5μm),以甲醇-乙腈-水(30:2 :65)为流动相,流速为1.0mL/min,检测波长250nm。
    颜春华等测定脑得生片中葛根素的含量,采用日本岛津LC-4A高效液相色谱仪;色谱柱DiamonsilTM (钻石) C18(200mm×4.6mm,5μm);流动相:乙腈-甲醇-0.1%枸橼酸溶液(5:25:75);紫外检测波长250nm;柱温室温。
    制备样品溶液时,一般以30%乙醇、50%乙醇、乙醇、甲醇、流动相或盐酸溶液(9→1000)等为溶剂,采用超声法提取。

    二、其它
    杨振林等测定葛根冲剂中葛根素含量,采用薄层- 紫外分光光度法,751GD 型分光光度计(上海分析仪器总厂)。薄层层析硅胶G板,以氯仿-甲醇-水(7:28:0.2)为展开剂,在紫外灯(365nm)下定葛根素位置,刮下斑点,用甲醇洗脱,测定波长为251±1nm。
    崔小兵等测定通脉颗粒剂中葛根素及阿魏酸的含量,采用双波长(λ1= 250nm ,λ2=313nm) 梯度洗脱法。Waters 2690 型高效液相色谱仪;色谱柱Kromasil C18柱(4.6mm×250mm,5μm);柱温为30℃,甲醇-1%醋酸水梯度洗脱;检测波长为250nm;柱温30℃。
    方崇波等采用离子络合紫外分光光度法测定葛根素及其制剂的含量,采用UV4/2401 紫外分光光度计(岛津)。方法::在pH=4.0条件下,葛根素和Al3+形成络合物,在339.8 nm波长处通过测定吸收度的改变来测定含量。

 
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