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酵母活体染色

放大字体  缩小字体 发布日期:2006-06-26
1)核DNA和线粒体DNA
1.当细胞培养到约107细胞/ml时,离心(5秒)收集细胞,再悬浮在70%乙醇中。
2.固定5分钟或5分钟以上,用水洗2次。
3.将细胞悬浮在含有50ng/ml的4,6-二脒基-2苯基吲哚的封固剂中。1mg/ml的4,6-二脒基-2苯基吲哚母液可在-20℃下贮存。
4.用紫外滤片观察。
2)线粒体
1.在生长培养基中培养细胞达到约107细胞/ml时,加入100ng/ml 3,3’-二已基噁羰花青碘化物(DiOC6,Sigma D3652或Molecular Probes)用乙醇把1mg/ml母液稀释到1/104。
2.培养5分钟或5分钟以上,用荧光素滤片观察。
3)液泡
1.当细胞生长到约107细胞/ml时,离心收集细胞(5秒),悬浮在含有50mmol/L柠檬酸钠(pH4.0)的YPD中。
2.加CDCFDA(羧基-2’,7’-二氯-荧光素双乙酸盐)到终浓度为10μmol/L。
3.保温10分钟或10分钟以上,用荧光滤片观察。
4)牙痕和几丁质
1.用生长培养基培养细胞达107细胞/ml时,加100μg/ml Calcofluor(荧光发光剂28;Sigma F3543)(用水将1mg/ml母液稀释到1/10,母液可在-20℃下黑暗保存数星期)。
2.培养5分钟或5分钟以上,用水洗2次,用紫外滤片观察。
 
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