指在160－170℃温度下，利用热辐射和灭菌器内热空气的对流以杀灭微生物及其芽抱的方法。干热灭菌法在灭菌温度下应保持2小时以上。决定此过程的时间，一般应包括：灭菌物品达到烘箱内灭菌温度的合理迟滞时间，完成灭菌的适宜的保温时间，以及灭菌物品恢复于室温的冷却时间。不同的温度灭菌过程所需的时间也不同：140℃必须在3小时以上，160－170℃在2小时以上。260℃为45分钟。由于灭菌过程时间长，因此有些物品不宜采用此法，如纤维织品160℃以上开始变焦，许多化学药品也不能用干热灭菌法，只有少数药物的粉针剂（如苯巴比妥钢）可在150℃干热灭菌1小时，磺胶等遇高热熔化或易分解的药物，一般采用140℃3小时灭菌。