成分：
　　蛋白胨　　　　　　1g
　　氯化钠　　　　　　5g
　　葡萄糖　　　　　　1g
　　磷酸二氢钾　　　　2g
　　0.4%酚红溶液　　　3mL
　　琼脂　　　　　　　20g
　　蒸馏水　　　　　　1000mL
　　20%尿素溶液　　　 100mL
　　pH7.2±0.1
制法：将除尿素和琼脂以外的成分配好，并校正pH，加入琼脂，加热溶化并分装烧瓶。121℃高压灭菌15min。冷至50～55℃，加入经除菌过滤的尿素溶液。尿素的最终浓度为2%，最终pH应为7.2±0.1。分装于灭菌试管内，放成斜面备用。
试验方法：挑取琼脂培养物接种，在36±1℃培养24h，观察结果。尿素酶阳性者由于产碱而使培养基变为红色。