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二级生物安全柜通过垂直层状薄片的HEPA过滤器过滤后，在安全柜内部形成向下流动的气流，即下沉气流，可有效防止实验操作过程中产生的气溶胶和微小颗粒逃逸出柜体，避免操作人员吸入有害的微生物或化学物质，从而保护操作人员的身体健康，为样品提供了一个相对无菌的局部环境，防止外界环境中的微生物、灰尘等污染物进入柜体，污染样品，确保实验结果的准确性和可靠性。同时，对于一些对环境敏感的样品，如某些细胞株、病毒样本等，能在安全柜的保护下维持其活性和稳定性，有利于实验的顺利进行。
将实验过程中产生的有害气体、气溶胶等污染物进行过滤和净化后再排放到室外，避免了这些污染物直接释放到实验室环境中，减少了对周围环境的污染，保护了实验室工作人员以及其他在场人员的健康，同时也防止了污染物对实验设备的腐蚀和损坏。
二级生物安全柜的测定步骤：
1.准备工作：
-清除生物安全柜内表面的污染。
-将所有物品置于安全柜内，以尽可能减少双臂进出前面开口的次数。
-关闭操作前窗，打开紫外灯，对工作台面，侧壁表面以及后壁内侧进行杀菌处理。
-稍微打开操作前窗，让工作区排气几分钟之后再开始工作。
2.现场检测：
-有下列情况之一时，应对生物安全柜进行现场检测：生物安全实验室竣工后，投入使用前，安装检查；被移动位置后；应进行检修后；更换过滤器后；生物安全柜一年一度的常规检测。
-现场检测应由有资质的专业人员按照生产商的说明对每一台生物安全柜的运行性能以及完整性进行评估，以检查其是否符合国家标准要求。安全柜防护效果的评估应该包括对安全柜的完整性、HEPA过滤器的泄漏、垂直气流的速度、工作窗口气流流向和平均风速、负压/换气次数、气流的烟雾模式以及警报和互锁系统进行测试。还可以选择进行漏电、光照度、紫外强度、噪音水平以及振动性测试。
3.定期维护：
-每三个月更换一次预过滤器。
-每年更换一次紫外灯。
-每周采用空气落菌数相似的方法进行无菌检查。
