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高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。
1、加水： 先将排水阀关闭，调整总阀至“全排”。然后，开启进水阀，放蒸馏水至蒸汽发生器内，待水进至距水表顶端大约1～2cm处时，关闭进水阀，并将总阀调至“关闭”。
2、装锅：
将待灭菌物品装入锅内，注意不要塞得过紧过满，盛有培养基的三角瓶和试管应立放或适度倾斜．以免灭菌过程中培养基污染棉塞。
3、关门：
按顺时针方向转动紧锁手柄，使撑挡进入门圈内。然后旋动八角转盘，使门和垫圈密合，以灭菌时不漏气为度，不宜太紧，以免损坏垫圈。
4、通电加温：
待电源控制开关的旋钮旋至“开”处，电源指示灯亮，表示已通电，然后再按灭菌物品所需灭菌汽压将旋切旋至0.07MPa、0.1mPa或0.14MPs处。此时电热指示灯亮，表示已通电加热。
5、保温保压：
当蒸汽套层内的蒸汽随加热达到自动控制压力时，电热指示灯会自动熄灭，表示停止加热。随着热力散发压力降低，电热指示灯在亮，表示继续加热，这表明压力控制器工作正常。当套层内的蒸汽加热到所选择的控制压力时，即可将套层内的蒸汽导入消毒室进行灭菌。此时应先将汽液分离器前的冷凝阀开放少许，然后将总阀调至“消毒”，套层内的蒸汽即通过总阀进入消毒室进行消毒，冷凝水则通过汽液分离器自动排出。这时蒸汽套层内蒸汽压力迅速下降，而消毒室内的蒸汽压力逐渐上升，消毒室内的温度表也随着物品被蒸汽加热而上升。当表的温度升到所需消毒温度(一般为121℃)时，开始计算灭菌时间，维持温度至灭菌完毕。
6、出锅：
灭菌完毕后，立即切断电源，按灭菌物品性质和要求，决定消毒室内的蒸汽是自然冷却还是采取“慢排”例如，器械、器皿、固体曲料、土壤、草炭等不致因压力骤然下降而受影响的物品，可直接将总阀调至“慢排”使消毒室内蒸汽迅速排出。当消毒室内压力下降至“0”时，方可缓慢转动锅门转盘并拨动紧锁手柄将门开启5～10cm。20～30min后将灭菌物品取出，此时灭菌物品即较干燥。溶液及培养基等物品灭菌完毕时，只能将总阀调至“慢排”，使消毒室内蒸汽慢慢排出，以免突然降低压力导致培养基剧烈沸腾。也可在灭菌完毕后，关闭总阀，让灭菌物品自然冷却。消毒宝压力表降至“0”时、再将总阀调至“慢排”数分钟取出灭菌物品。
7、连续操作：
如灭菌物品较多需连续操作时，应先检查水位。有足够水量时，可连续使用。如需加水、应把总阀调至“全排”，打开进水阀加水后继续操作。
8、保养：
每次灭菌完毕后，关闭电源，停止加热，随后将总阀调至“全排”，排出套层内的蒸汽。开启铂门少许，散发剩余蒸汽，使消毒室内壁经常保持干燥，同时排除蒸汽发生器内的余水。
高压蒸汽灭菌锅操作步骤
2、装锅：
将待灭菌物品装入锅内，注意不要塞得过紧过满，盛有培养基的三角瓶和试管应立放或适度倾斜．以免灭菌过程中培养基污染棉塞。
3、关门：
按顺时针方向转动紧锁手柄，使撑挡进入门圈内。然后旋动八角转盘，使门和垫圈密合，以灭菌时不漏气为度，不宜太紧，以免损坏垫圈。
4、通电加温：
待电源控制开关的旋钮旋至“开”处，电源指示灯亮，表示已通电，然后再按灭菌物品所需灭菌汽压将旋切旋至0.07MPa、0.1mPa或0.14MPs处。此时电热指示灯亮，表示已通电加热。
5、保温保压：
当蒸汽套层内的蒸汽随加热达到自动控制压力时，电热指示灯会自动熄灭，表示停止加热。随着热力散发压力降低，电热指示灯在亮，表示继续加热，这表明压力控制器工作正常。当套层内的蒸汽加热到所选择的控制压力时，即可将套层内的蒸汽导入消毒室进行灭菌。此时应先将汽液分离器前的冷凝阀开放少许，然后将总阀调至“消毒”，套层内的蒸汽即通过总阀进入消毒室进行消毒，冷凝水则通过汽液分离器自动排出。这时蒸汽套层内蒸汽压力迅速下降，而消毒室内的蒸汽压力逐渐上升，消毒室内的温度表也随着物品被蒸汽加热而上升。当表的温度升到所需消毒温度(一般为121℃)时，开始计算灭菌时间，维持温度至灭菌完毕。
6、出锅：
灭菌完毕后，立即切断电源，按灭菌物品性质和要求，决定消毒室内的蒸汽是自然冷却还是采取“慢排”例如，器械、器皿、固体曲料、土壤、草炭等不致因压力骤然下降而受影响的物品，可直接将总阀调至“慢排”使消毒室内蒸汽迅速排出。当消毒室内压力下降至“0”时，方可缓慢转动锅门转盘并拨动紧锁手柄将门开启5～10cm。20～30min后将灭菌物品取出，此时灭菌物品即较干燥。溶液及培养基等物品灭菌完毕时，只能将总阀调至“慢排”，使消毒室内蒸汽慢慢排出，以免突然降低压力导致培养基剧烈沸腾。也可在灭菌完毕后，关闭总阀，让灭菌物品自然冷却。消毒宝压力表降至“0”时、再将总阀调至“慢排”数分钟取出灭菌物品。
7、连续操作：
如灭菌物品较多需连续操作时，应先检查水位。有足够水量时，可连续使用。如需加水、应把总阀调至“全排”，打开进水阀加水后继续操作。
8、保养：
每次灭菌完毕后，关闭电源，停止加热，随后将总阀调至“全排”，排出套层内的蒸汽。开启铂门少许，散发剩余蒸汽，使消毒室内壁经常保持干燥，同时排除蒸汽发生器内的余水。
